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灵芝有效成分的研究(二)

详细说明

    第二节  多糖类化合物 
    多糖类化合物是灵芝所含化学成分之一,现已证明,灵芝多糖类具有抗肿瘤作用、免疫调节作用、降血糖作用、降血脂作用、抗氧化作用和抗衰老作用,故灵芝多糖类是灵芝的主要有效成分。临床试验也证实,灵芝多糖可作为肿瘤化学治疗和放射治疗的有效辅助治疗药。有关灵芝多糖类的分离、纯化、结构确证的研究方兴未艾,迄今仍为国内外瞩目的重要课题。

    一、灵芝多糖类的分离、纯化及鉴定
    灵芝多糖类的分离、纯化及结构确证的方法及步骤可概括如下:多采用热水提取、分部沉淀的方式分离灵芝的多糖组分;进一步经各种层析如DEAE纤维素柱色谱、Sephadex G75柱色谱,凝胶过滤如Sepharose CL—4B凝胶过滤,高压电泳和聚丙酰胺凝胶电泳等处理可获纯化的多糖;后者经酸水解、纸色谱、气相色谱分析可确定其单糖组分,经酶水解可检测殊碳糖(anomeric)结构;经甲基化技术及Smith降解、气相色谱、气质联用、紫外及红外光谱分析、核磁共振等可确定多糖的连接方式和基本化学结构。多糖的分子量可通过凝胶柱色谱如SephadeaxG—100柱色谱、超离心测沉降系数等方法测定,一般在测得分子量范围后,求出平均分子量。

    二、灵芝多糖类的理化特性
    由于灵芝的种类、产地、分离提取方法各异,所获灵芝多糖的理化特性、分子量、单糖组分和连接方式不同,生物活性亦有差异。如Hiroshi等(1985)报道,赤芝子实体热水提取物经浓缩、透析及系列色谱后获得两种多糖ganoderan A和B。ganoderan A的分子量9 300,旋光度[α]D+58.8°,ganoderan B分子量3 600,旋光度[α]+33.3°,二者对小鼠均具降血糖作用。随后,他们又从赤芝子实体中分离出两个降血糖有效成分ganoderan B和C,均为糖肽,分子量分别为7 400和5 800。物理化学和化学研究证明,ganoderan B含吡喃葡萄糖酰基β-1→3主链和β-1→6侧链,ganoderan C则含D-吡喃葡萄糖酰基β-1→3和β-1→6连接和D-吡喃半乳糖酰基α-1→6连接。Mizuno等(1986)报告,赤芝子实体经85%乙醇(80℃),热水(100℃),3%草酸铵(100℃)和5%氢氧化钠(30℃)提取后,残渣再用5%氢氧化钠(含0.1%硼氢化钠,80℃),20%氢氧化钠(含0.1%硼氢化钠,30℃)和5%氯化锂(溶于二甲醋酸铵中,70℃)提取,获多糖组分A、B、C。A和B经乙醇分离,醋酸沉淀,Sepharose CL-4B凝胶过滤,得4个β-葡聚糖,其中I和II来自A,III和IV来自B。从C分离出脱乙酰壳多糖(chitosan)(V)。I—V经80%甲酸(85℃)处理可获相应的甲酰化多糖和低分子量多糖。I—IV主要由葡萄糖和少量的糖醛酸、木糖、甘露糖组成,并具β-(1→3)-D-葡聚糖主链和β-(1→6)葡萄糖基侧链,其分子量分别为330 000、60 000、160 000和110 000。不同之处是IV不含木糖,但含1.2%蛋白质。V经酸水解后,主要含葡萄糖胺,并含少量葡萄糖,经红外光谱和X射线分析证明为脱乙酰壳多糖。给小鼠腹腔注射II、III以及III的甲酸酯和I~IV的低分子量多糖均具有宿主中介性的抗肿瘤活性,半数抑瘤量(ID50)分别为42.5mg/kg、34.1mg/kg、70.2mg/kg、22.4mg/kg、17.0mg/kg、32.1mg/kg和25.8mg/kg。Mizuno等(1985)报告,赤芝子实体经水提取后,其残渣经3%草酸铵溶液(100℃)和5%氢氧化钠溶液(30℃)提取后,得2个水不溶多糖A和B。A经真空浓缩、透析、冻干,Shepharose CL-48凝胶过滤,获主要组分C。B用醋酸中和至pH5~6,得酸性异多糖D,加乙醇沉淀得糖蛋白E和另一种异多糖。C由酸性β-D-葡聚糖构成,含葡萄糖77%、葡萄糖醛酸10.3%以及少量的果糖、木糖、甘露糖和半乳糖,分子量10 000~30 000。D的分离程序同A,它含两个主要成分G和H,G和H均为酸性异多糖,分别含葡萄糖92%和95%,葡糖醛酸9.7%和13.0%以及少量果糖、木糖、甘露糖、乳糖,分子量70 000~100 000。给小鼠腹腔注射       第二节  多糖类化合物 
    多糖类化合物是灵芝所含化学成分之一,现已证明,灵芝多糖类具有抗肿瘤作用、免疫调节作用、降血糖作用、降血脂作用、抗氧化作用和抗衰老作用,故灵芝多糖类是灵芝的主要有效成分。临床试验也证实,灵芝多糖可作为肿瘤化学治疗和放射治疗的有效辅助治疗药。有关灵芝多糖类的分离、纯化、结构确证的研究方兴未艾,迄今仍为国内外瞩目的重要课题。

    一、灵芝多糖类的分离、纯化及鉴定
    灵芝多糖类的分离、纯化及结构确证的方法及步骤可概括如下:多采用热水提取、分部沉淀的方式分离灵芝的多糖组分;进一步经各种层析如DEAE纤维素柱色谱、Sephadex G75柱色谱,凝胶过滤如Sepharose CL—4B凝胶过滤,高压电泳和聚丙酰胺凝胶电泳等处理可获纯化的多糖;后者经酸水解、纸色谱、气相色谱分析可确定其单糖组分,经酶水解可检测殊碳糖(anomeric)结构;经甲基化技术及Smith降解、气相色谱、气质联用、紫外及红外光谱分析、核磁共振等可确定多糖的连接方式和基本化学结构。多糖的分子量可通过凝胶柱色谱如SephadeaxG—100柱色谱、超离心测沉降系数等方法测定,一般在测得分子量范围后,求出平均分子量。

    二、灵芝多糖类的理化特性
    由于灵芝的种类、产地、分离提取方法各异,所获灵芝多糖的理化特性、分子量、单糖组分和连接方式不同,生物活性亦有差异。如Hiroshi等(1985)报道,赤芝子实体热水提取物经浓缩、透析及系列色谱后获得两种多糖ganoderan A和B。ganoderan A的分子量9 300,旋光度[α]D+58.8°,ganoderan B分子量3 600,旋光度[α]+33.3°,二者对小鼠均具降血糖作用。随后,他们又从赤芝子实体中分离出两个降血糖有效成分ganoderan B和C,均为糖肽,分子量分别为7 400和5 800。物理化学和化学研究证明,ganoderan B含吡喃葡萄糖酰基β-1→3主链和β-1→6侧链,ganoderan C则含D-吡喃葡萄糖酰基β-1→3和β-1→6连接和D-吡喃半乳糖酰基α-1→6连接。Mizuno等(1986)报告,赤芝子实体经85%乙醇(80℃),热水(100℃),3%草酸铵(100℃)和5%氢氧化钠(30℃)提取后,残渣再用5%氢氧化钠(含0.1%硼氢化钠,80℃),20%氢氧化钠(含0.1%硼氢化钠,30℃)和5%氯化锂(溶于二甲醋酸铵中,70℃)提取,获多糖组分A、B、C。A和B经乙醇分离,醋酸沉淀,Sepharose CL-4B凝胶过滤,得4个β-葡聚糖,其中I和II来自A,III和IV来自B。从C分离出脱乙酰壳多糖(chitosan)(V)。I—V经80%甲酸(85℃)处理可获相应的甲酰化多糖和低分子量多糖。I—IV主要由葡萄糖和少量的糖醛酸、木糖、甘露糖组成,并具β-(1→3)-D-葡聚糖主链和β-(1→6)葡萄糖基侧链,其分子量分别为330 000、60 000、160 000和110 000。不同之处是IV不含木糖,但含1.2%蛋白质。V经酸水解后,主要含葡萄糖胺,并含少量葡萄糖,经红外光谱和X射线分析证明为脱乙酰壳多糖。给小鼠腹腔注射II、III以及III的甲酸酯和I~IV的低分子量多糖均具有宿主中介性的抗肿瘤活性,半数抑瘤量(ID50)分别为42.5mg/kg、34.1mg/kg、70.2mg/kg、22.4mg/kg、17.0mg/kg、32.1mg/kg和25.8mg/kg。Mizuno等(1985)报告,赤芝子实体经水提取后,其残渣经3%草酸铵溶液(100℃)和5%氢氧化钠溶液(30℃)提取后,得2个水不溶多糖A和B。A经真空浓缩、透析、冻干,Shepharose CL-48凝胶过滤,获主要组分C。B用醋酸中和至pH5~6,得酸性异多糖D,加乙醇沉淀得糖蛋白E和另一种异多糖。C由酸性β-D-葡聚糖构成,含葡萄糖77%、葡萄糖醛酸10.3%以及少量的果糖、木糖、甘露糖和半乳糖A—H对S180均具有抗肿瘤活性,50%抑瘤量为(6.3~26.3)mg/kg,但口服无效。1989~1994李荣芷、何云庆等先后报告,赤芝子实体经热水提取,乙醇分部沉淀、透析、除蛋白等步骤得灵芝多糖BN3A、BN3B、BN3C和GL-A、GL-B、GL-C。进一步经DEAE纤维素柱色谱分离,酶解,酸水解,过碘酸氧化,甲酸生成,Smith降解、气相色谱、高压液相色谱分析和光谱分析等从BN3B、BN3C、GL-A、GL-B和GL-C中共分离鉴定了18个灵芝多糖均一体,其中5个肽多糖、4个葡聚糖,其余为杂多糖。